1打开image J软件；

（图片1 image J工作界面）

2 打开图片所在位置：file- open- 找到需要分析的图片；

（图2 image J打开图片后呈现界面）

3 将图片颜色通道分割：image- color- split channels（颜色将被切割为red- green- blue三个通道），本次分析的蓝色通道（blue），其它颜色通道可以关闭，或者直接选择蓝色通道进行分析即可；

（图3 image J分割图片为三个颜色通道设置）

（图4 颜色通道被分割为blue- green- red，只需选择要分析的图层即可）

4手动调节阈值

4.1手动调节设置：image- adjust- threshold

（图5 手动设置图片阈值设置操作）

4.2 手动调节阈值：根据红色箭头所指位置调动阈值，保证着色部分被全部覆盖，黑色背景（Dark background 红框）务必选中；

（图6 手动调节操作及设置）

5 自动调节阈值（建议选中自动，避免人为因素）

5.1 自动调节阈值：analyze- set measurements

（图7 自动调节阈值设置操作）

5.2 自动调节阈值参数设置，勾选下列红框部分；

(图8 自动测定设置参数)

6 计算数值：analyze- measure （Ctrl + M建议记住，后期直接使用快捷键在批量计算很实用）；

(图9 测量荧光数值操作)

7 数据导出：results界面的mean及为我们需要的荧光值，执行file- save as即可保存数据；

    （图9 数值结果）                （图10 导出数值方式）